Il principio base della sintesi del DNA

La sintesi chimica del DNA si basa sulla strategia di sintesi in fase solida e sulla chimica della fosforamidite.Diversamente dalla sintesi biologica del DNA, il materiale nella sintesi chimica del DNA è DMT (4, 4-dimetossitritile) e deossiribossiside modificato con fosforamidite, come mostrato nella Figura 1. La sintesi del DNA viene eseguita sul supporto solido (possiamo offrire vari diColonna di sintesi degli oligo), cioè CPG (vetro a pori controllati) e PS (polistirene), e l'intera sintesi viene eseguita su unSintetizzatore di DNA/RNA, che è la nostra attrezzatura principale, ha diversi modelli come: sintetizzatore a canale singolo HY, HY-12, HY-192 e così via, la direzione di sintesi va da 3' a 5' e un nucleotide viene introdotto nel supporto solido tramite uno ciclo di sintesi.Un ciclo tipicamente di sintesi contiene quattro fasi: deprotezione, accoppiamento, tappatura e ossidazione (Figura 2).La Deprotezione è impostata per rimuovere il gruppo DMT sul supporto solido o il gruppo ossidrile 5' sul nucleoside precedente, come reagente di deprotezione viene utilizzato l'acido tricloroacetico al 3% in diclorometano.Quindi al deossiribossiside modificato con fosforamidite è stato consentito di esporre il gruppo ossidrile con l'assistenza dell'attivatore, vale a dire 5-etiltiotetrazolo o 4,5-dicianoimidazolo, formando il fosfitetriestere (III), e si è realizzata la fase di accoppiamento.Viene eseguita una fase di capping per bloccare il gruppo ossidrile non reagito durante la fase di accoppiamento, per ridurre al minimo la formazione di sequenze di difetti indesiderate.Infine, il fosfitetriestere instabile (III) viene ossidato a fosfortriestere chimicamente stabile (V) con iodio come ossidante in presenza di piridina.

Il DNA sintetizzato può essere scisso dal supporto solido mediante aminolisi, il gruppo protetto 2-cianoetile sul fosfortriestere e l'ammide sulla base azotata vengono scissi allo stesso tempo, le piastre di sintesi e le colonne di sintesi nei rack vengono posizionate direttamente nella camera di reazione delAttrezzatura di deprotezione.Il DNA grezzo può essere preparato mediante HPLC, elettroforesi e OPC su richiesta, possiamo anche fornirvi ilAttrezzature di purificazioneper la post-elaborazione.